细胞侵袭实验原理及步骤

对于细胞入侵的研究人员来说，传统的测试方法具有染色和计数会占用实验人员大量精力、数据单一、实验通量和重复性低的特点。本实验采用罗氏新方法监测细胞入侵CIM-Plate16结合RTCADPAnalyzer这种独特的装置可以在没有标记的情况下实时监测细胞入侵。CIM-Plate16由上下室组成，由微孔膜隔开。金串珠状微电极紧密结合，附着在一起，附着在一起PET膜下层，覆盖80%的表面积。向下室添加趋化剂，在上室添加研究细胞，选择性添加细胞外基质胶。当细胞试图通过膜进入下室并附着在电极上时，系统可以测量电阻抗变化。随着微孔膜下细胞数量的增加和电阻抗的增加，表现为细胞指数的变化RTCADPAnalyzer记录下来。

接下来，我们将介绍细胞入侵实验的整个过程
一.编辑实验程序
打开RTCAsoftware，可以看到三个用户权限ID，我们用这个实验administrator登录，密码为小写administrator。userone和usertwo登录时不需要密码。点击确认后，可根据实验要求选择合适的。cradle。
启动RTCADP软件完成后，如果软件仍然停留在上一个实验界面，可以在上一个实验界面file中点击release，打开一个新的实验。
experimentnote在页面下，填写实验的相关信息，包括实验名称、使用细胞板的细胞板IDnumber信息等，备注栏填写一些简单的实验设计。Layout在页面下，输入本实验的设置，选择A1-H1、填写细胞系名称，细胞类型为HT-1080，每孔2万个细胞，点击apply，完成设置信息。
选择A1-F1.本实验将从高到低浓度Matrigel高浓度为10%，用两倍稀释度稀释，两次重复。G1和H1，填写serumFreeMedium作为空白对比，保存后，将A1-H1信息复制到第二排。此时可以看到16孔板设置完成的实验信息。
转到schedule页面，点击添加一个按钮。第一步是检测背景值的实验步骤，step-status显示为IDLE，表示未完成，请勿更改背景检测步骤参数。
点击添加步骤按钮，建立第二个实验步骤。在这里，您可以根据测试时间的长测试次数和间隔。
二.准备实验和包被
从冰箱里取出Assemblingtool以及CIMplate上板。打开上板，可以看到板上和盖子上都有蓝点标记，把蓝点放在蓝点上，把板放在板上。Assemblingtool上。由于CIMplate板的电极铺在孔膜的背面，所以上板不能直接接触桌面，安装时要特别注意。
1.首先进行Matrigel每孔加入50包被，每孔加入50包被µlmatrigel，每次完成梯度，即4个孔后，立即从孔内轻轻吸出30个孔µlMatrigel。如有气泡，用枪头小心清除。
2.空白对照的四个孔也增加了50个µl无血清培养基，然后吸出30µl。
3.盖上盖子，将整个盖子盖上，Assamblingtool与板一起，放入培养箱孵化4-5小时，使其与板一起孵化4-5小时，Matrigel凝结。
三.组装RTCACIMPlate-16以及测量CI背景值
1.取出CIMplate下板，蓝点对蓝点方向，放置在蓝点方向，Assamblingtool在第二个槽中，在下板中加入160µl预热良好的完整训练基，动作缓慢，后轻抬起枪头，可见整个液面形成美丽的弧形。它将是一个很好的弧形。CIM-Plate16AssemblyTool旋转90度，小心不要干扰液板，水平移动到下板上方，快速用力扣，中间不能停止，听到卡两次，表明上下板安装完成。检查安装是否紧密相连。
2.在上板每孔加300µl无血清培养基，用上板盖覆盖整块CIM-Plate16放入RTCADP分析仪。在培养箱中平衡一小时。
3.一小时后，进入schedule页面，选择第一步，点击开始按钮。测量背景值后，显示显示。readyforstartingnextstep.回到Message页面，看看是否有报错信息。
四.准备好细胞，并加入RTCACIMPlate-16上腔
1.取出CIMplate，重新放回超净台Assamblingtool每孔加入100微升细胞悬万细胞的细胞悬浮液。细胞准备参考光盘的细胞传代和其他视频的相关操作，重悬HT-1080细胞。
2.为避免培养箱因温差引起的蒸腾作用而产生边缘效应，CIM培养板，常温下静置半小时。
五.运行实验
将CIMplate重新放回RTCADP在分析仪上，看到提示platescanned,connectionisOK然后，点击开始第二步。此时，机器开始每15分钟检测一次孔内细胞的迁移。
六.实验结果分析
在CellPlot页面，选择显示平均值和标准差，点击add,可以看到不同组获得的实验信号。如图所示，当时，当时。Matrigel当浓度较高时，细胞难度越大，无血清培养基对照孔内细胞入侵信号非常明显。根据包包被子，Matrigel浓度由高到低，细胞入侵能力逐渐增强。
七.注意事项
1.CIM-Plate16不能重复使用：
CIM-Plate板上可能有细胞或包裹试剂，影响再实验结果的可靠性和重复性。
2.健康的细胞培养：
健康细胞的入侵效率更高。此外，较低的代数可以保证每个实验中使用的细胞的稳定性。实验细胞必须在前一天进行细胞替，并确保细胞在消化过程中融合60%-80%。
3.Matrigel使用要求：
由于Matrigel常温下凝结成胶状非常容易，不能使用。Matrigel放在冰上。入侵实验的前一天，需要将所需要的东西放在冰上。Matrigel取出-80度，放入4度保存，使其溶解成液状，此外，所有需要接触的都需要接触Matrigel耗材，包括枪头、移液管、CIMplate上板等需要提前放在冰箱-20或4度预冷。
4.无血清培养基制备细胞悬液：
在制备细胞悬液之前，可先让细胞去血清饥饿12-24h，进一步层含有血清，下层培养液的趋化作用就会减弱甚至消失，影响实验的进行。