Transwell细胞迁移检测


1. 技术简介

诱导转移(Transwell)是肿瘤运动性研究常用的方法,要是体外检测肿瘤细胞主动移行的能力,除诱导转移外,还有划痕实验也是常用的方法。细胞运动性的研究,尤其是在肿瘤细胞的侵蚀转移中应用很广泛。肿瘤转移是恶性肿瘤生物学特征之一,在肿瘤转移过程中的某些阶段,肿瘤细胞表现较强的运动能力,如肿瘤细胞从原发瘤灶分离,进而侵入到临近组织及再穿过血管壁进入血液循环和穿出血管壁进入激发部位等,因为细胞运动性研究再肿瘤细胞侵袭和转移的机制上由重要的作用。

 

 


 

 

2. 技术原理

Transwell小室的外形是可以放置在孔板中的小杯子,杯底层是一层具有通透性的聚碳酸酯膜,一般膜的孔径选择8μm的孔径。将Transwell小室放入培养板中,Transwel小室称为上室,培养板称为下室,上下室以聚碳酸酯膜隔离。将细胞接种在上室内,由于聚碳酸酯膜具有通透性,下层培养基液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养基的成分对细胞生长、运动等的影响。另外,Transwel小室有不同的孔径和不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等方面的研究。

与迁移实验不同的是,聚碳酸酯膜上室铺一层基质胶,用于模仿体内细胞外基质,细胞欲进入下室,需要先分泌基质金属蛋白酶(MMPS)将基质胶分解,放可以通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞两可以反应肿瘤细胞的侵袭能力。

 

 

 


 

 

3. 案例分析

3.1 准备细胞

对细胞进行常规培养、换液、传代;  

 

3.2 包被基质胶Transwell小室

(1)于4℃溶解matrigel胶过夜,将小室、培养板、枪头、1640培养基等4℃冰箱预冷;

(2)用冷的无血清1640培养基稀释matrigel胶,Matrigel:1640培养基=1:8,每个小室加45ul matrigel工作液;

(3)37℃,5%CO2培养箱风干过夜。

 

3.3  细胞处理及细胞侵袭力测定

(1)对目的细胞进行常规培养、换液、传代;待细胞融合至70%~80%时,将细胞接种于6孔板中。

(2)第二天分别加入不同浓度(0、1、10 ng/ml)的药物对细胞进行处理48h后,常规消化、离心,培养基洗涤并制备细胞悬液收集各个处理组细胞,每孔加入5×104个细胞于 Transwell细胞培养板的小室上室,在下室加入600ul完全培养基。

(4)分别孵育48小时后,PBS洗涤2遍,甲醛固定30min,PBS洗涤2遍,0.1%结晶紫染色15min,PBS洗涤2遍,风干后,显微镜(100×)下随机选取5个随机视野,进行拍照。

 

3.3  统计分析

(1)用软件对染色的细胞进行细胞计数,并进行统计分析。

3.4 结果分析

  

0ng/ml                                             1ng/ml                                                10 ng/ml

图1 不同药物处理的细胞侵袭能力图

 

图2 不同药物处理的细胞侵袭能力柱状图

结果分析:根据以上结果可知,药物组的侵袭力均高于对照组,故说明药物对目的细胞可以促进细胞的侵袭能力。

 

 

 

2022年7月28日 20:30
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