细胞划痕检测

1. 技术简介

 细胞划痕是检测肿瘤细胞的运动特性的方法之一。细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合，在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程，是研究细胞迁移的体外实验中简单的方法。

2.  案列介绍

• 为研究某药物对目的细胞迁移能力产生的影响，将药物加入到细胞中培养，通过划痕实验检测细胞的迁移能力。实验设计了2组实验：NC对照组、10ng/ml药物处理组.

2.1 实验方法

（1） 先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5-1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

（2） 将细胞进行常规培养、换液，待细胞融合至70%~80%时，将细胞接种于6孔板中，接种16h后，给予不同浓度的药物刺激细胞，待细胞融合至100%时予进行实验；

（2） 用10μl无菌微量移液枪头在细胞板上划痕，用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜，PBS液冲洗2-3次以去除被刮下的细胞，加入1%血清培养基。

（3） 于37℃，5%CO2、无血清培养基、不同浓度条件下培养箱中继续培养，分别于划痕后0，6，24，32, 48小时取样，拍照。

（4）用显微镜自带测量软件测量各组细胞相同时间点任意3个部位划痕面积，计算细胞迁移距离迁移率=（0h-其他时间点）/0h，以反映各组细胞运动迁移能力，数据统计。

2.2 结果分析

图1 药物处理对细胞侵袭能力的影响

图2 药物对细胞侵袭能力影响的统计学分析

结果分析：根据以上结果可知，药物组的侵袭力均高于对照组，故说明药物对目的细胞可以促进细胞的侵袭能力。