CoIP免疫共沉淀

1. 技术介绍

蛋白质控制了细胞中的所有生物系统，通常它们不是独立作用，绝大多数蛋白质会与其他蛋白质相互作用，一起参与生命过程。免疫共沉淀是研究蛋白与蛋白互作的一种常用的方法，其原理基于抗原-抗体免疫反应，利用抗体结合于琼脂糖磁珠上的Protein A/G，在蛋白液中加入抗原特异的抗体进行孵育，当抗体免疫沉淀抗原蛋白时，能与抗原蛋白结合的目的蛋白一并被沉淀下来，形成“目标蛋白+抗原蛋白+抗体+Protein A/G”免疫复合物，经免疫印迹或质谱检测互作的蛋白。

2. 实验方法

        CoIP-MS实验的流程包括以下几个主要步骤，蛋白液与抗体孵育→免疫复合物与蛋白A/G琼脂糖磁珠孵育结合→去除非互作蛋白→洗脱获得蛋白互作复合物→蛋白互作复合物进行WB检测/质谱鉴定。如下图所示：

3. 技术优势

（1）可以获取直接或者间接相互作用的蛋白；

（2）互作的蛋白质都是在胞内经翻译后表达的，处于天然状态；

（3）蛋白的相互作用的过程是在胞内自然状态下进行的，接近真实的互作过程；

（4）可以研究具有修饰的目的蛋白；

（5）操作流程简便。

4. 注意事项

（1）为获取适用于免疫共沉淀的蛋白，需要在温和的裂解条件下进行蛋白提取；

（2）使用可用于免疫共沉淀的抗体；

（3）设计合理的对照。

5. 结果案例